HPLC法测定中药材能力验证样品中红景天苷含量的不确定度评定

田树兴; 丁艳谱; 周崇富; 刘红光; 李军山

doi:10.12338/j.issn.2096-9015.2021.0149

HPLC法测定中药材能力验证样品中红景天苷含量的不确定度评定

doi: 10.12338/j.issn.2096-9015.2021.0149

田树兴^{1, 2,},
丁艳谱³,
周崇富^{1, 2},
刘红光^{1, 2},
李军山^{2, 3}

1.
云南神威施普瑞药业有限公司，楚雄 675000
2.
楚雄神威施普瑞药物研究有限公司，楚雄 675000
3.
神威药业集团有限公司，石家庄 051430

基金项目: 云南省重大科技专项（2019ZF008）。

详细信息

作者简介:
田树兴（1990-），云南神威施普瑞药业有限公司助理工程师，研究方向：药品成分研究及检测等，邮箱:tianshuxing12@163.com

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出版历程
- 网络出版日期: 2022-03-03

Uncertainty Evaluation of Determination of Salidroside in Proficiency Testing Samples of Traditional Chinese Medicine by HPLC

TIAN Shuxing^{1, 2
,},
DING Yanpu³,
ZHOU Chongfu^{1, 2},
LIU Hongguang^{1, 2},
LI Junshan^{2, 3}

1.
Yunnan Shineway Spirin Pharmaceutical Co. Ltd., Chuxiong 675000, China
2.
Chuxiong Shineway Spirin Pharmaceutical Research Co. Ltd., Chuxiong 675000, China
3.
Shineway Pharmaceutical Group Ltd., Shijiazhuang 051430, China

摘要

摘要: 为评定高效液相色谱（HPLC）法测定中药材能力验证样品中红景天苷含量的不确定度，采用《中华人民共和国药典》2015年版一部红景天含量测定方法，对红景天粉末能力验证样品进行测定，得出红景天苷含量。依据国家计量技术规范JJF 1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》，对红景天粉末（样品No.153和No.275）2个样品中红景天苷含量测定的不确定度来源进行分析。通过建立数学模型量化不确定度分量，计算合成不确定度和扩展不确定度，并与能力验证结果进行对比。实验结果表明，样品No.153红景天粉末样品测定结果报告为1.41%±0.05%，k=2;样品No.275红景天粉末样品测定结果报告为2.58%±0.08%，k=2，且能力验证结果为满意；2个样品红景天苷含量测量不确定度均主要来源于重复性实验、标准曲线拟合以及对照品系列溶液稀释3部分。该研究可为评价红景天苷含量测定结果的质量和控制实验室内部质量提供参考；同时不确定度评定和能力验证结果表明，实验室在102.8 μg/mL至1028 μg/mL的浓度水平上均有能力开展中药材中红景天苷的含量测定并能保证数据可靠。
- 不确定度 /
- 红景天苷 /
- 高效液相色谱法 /
- 能力验证
Abstract: To evaluate the uncertainty of determination of Salidroside in proficiency testing samples of traditional Chinese medicine by high-performance liquid chromatography (HPLC), the content of salidroside was determined by the content determination method of Rhodiola in the first part of Pharmacopoeia of the People's Republic of China (2015 Edition). According to JJF 1059.1-2012 "Evaluation and Expression of Uncertainty in Measurement", the sources of uncertainty in the determination of Salidroside in two samples of Rhodiola powder No. 153 and No. 275 were analyzed. The mathematical model is established to quantify the uncertainty components, and the combined uncertainty and expanded uncertainty are calculated and compared with the results of capability verification. The result of No.153 Rhodiola powder sample was (1.41±0.05) % with k=2, the result of No.275 Rhodiola powder sample was (2.58±0.08)% with k=2, and the result of the proficiency test was satisfactory. The uncertainty of salidroside content in the two samples mainly came from repeatability tests, standard curve fitting, and dilution of reference series solution. This study can provide a reference for evaluating the quality of salidroside content determination results and controlling the internal quality of the laboratory. At the same time, uncertainty evaluation and proficiency testing results showed that the laboratory was capable of conducting the determination of salidroside in Chinese medicinal materials at the concentration level from 102.8 μg/mL to 1028 μg/mL and ensure the reliability of data.
- uncertainty /
- salidroside /
- high performance liquid chromatography /
- proficiency testing

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图 1 红景天苷的峰面积

Figure 1. Peak area of Salidroside

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表 1 各量器具校准引入的不确定度分量

Table 1. The uncertainty component introduced by the calibration of each measuring instrument

各量器具	容量允差u	标准不确定度u(V)=u/$ \sqrt 6 $ mL	相对标准不确定度u_rel(V_n)=u(V)/V_n
A级容量瓶10 mL	±0.020 mL	0.00816	u_rel(V_容10)=0.000816
A级容量瓶20 mL	±0.03 mL	0.0122	u_rel(V_容20)=0.000610
10000 μL移液器1000 μL	±1.0 %	0.00408	u_rel(V_移1)=0.00408
10000 μL移液器2500 μL	±1.0 %	0.00408	u_rel(V_移2.5)=0.00163
10000 μL移液器5000 μL	±0.6 %	0.00245	u_rel(V_移5)=0.000490
10000 μL移液器8000 μL	±0.6 %	0.00245	u_rel(V_移8)=0.000306
A级单标线吸量管10 mL	±0.020 mL	0.00816	u_rel(V_单10)=0.000816

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表 2 各量器具实验室温度变化引入的不确定度分量

Table 2. Uncertainty component introduced by laboratory temperature change of each measuring instrument

各量器具	标准不确定度u(T_n)=2×V_n×1.19×10⁻³/$ \sqrt 3 $ mL	相对标准不确定度u_rel(T_n)=u(T_n)/V_n
A级容量瓶10 mL	0.0137	u_rel(T_容10)=0.00137
A级容量瓶20 mL	0.0275	u_rel(T_容20)=0.00138
10000 μL移液器1000 μL	0.00137	u_rel(T_移1)=0.00137
10000 μL移液器2500 μL	0.00344	u_rel(T_移2.5)=0.00138
10000 μL移液器5000 μL	0.00687	u_rel(T_移5)=0.00137
10000 μL移液器8000 μL	0.0110	u_rel(T_移8)=0.00138
A级单标线吸量管10 mL	0.0137	u_rel(T_单10)=0.00137

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表 3 样品中红景天苷含量测定结果

Table 3. Determination results of Salidroside in samples

序号	试样NO.153 浓度 μg/mL	试样NO.275 浓度 μg/mL	试样NO.153 含量 %	试样NO.275 含量 %
1	704	1271	1.397	2.619
2	699	1267	1.400	2.637
3	690	1293	1.448	2.574
4	720	1299	1.445	2.570
5	722	1326	1.424	2.608
6	719	1290	1.408	2.522
7	694	1281	1.402	2.533
8	691	1284	1.388	2.580
平均值	705	1289	1.41	2.58
s(x)			0.0225	0.0410

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表 4 对照品溶液浓度和峰面积

Table 4. Reference solution concentration and peak area

浓度 μg/mL	峰面积Y
浓度 μg/mL	1	2	平均值
102.8	320854	317325	319089.5
257.0	805989	806887	806438
514.0	1620155	1600606	1610381
824.4	2535317	2531067	2533192
1028.0	3153713	3171024	3162369

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表 5 各分量相对标准不确定度

Table 5. Relative standard uncertainty of each component

不确定度分量	类型	试样NO.153相对标准不确定度	试样NO.275相对标准不确定度
对照品系列溶液u_rel(C_R)	B	0.00650	0.00650
样品溶液制备u_rel(m)	B	0.00179	0.00179
方法回收率u_rel(rec)	B	0.000635	0.000635
重复性实验u_rel(x)	A	0.0133	0.0132
标准曲线拟合u_rel(C)	A	0.00637	0.00538
液相色谱仪重复性u_rel(J)	B	0.000404	0.000404

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